Estando el emperador en Nápoles, el 24 de octubre de 1535 fallece en Milán el duque Francesco Sforza, legando el dominio al emperador ante su falta de descendencia. Inmediatamente, la guarnición alemana del castillo, gobernado por Antonio Leyva, iza el pendón imperial. Este gesto encendería Pese a haber renunciado oficialmente al ducado en la paz de Cambrai, Francisco I de Francia volvió a reclamarlo, encendiendo así la mecha de para una nueva guerra en Italia. El 25 de diciembre fallece en Madrid el príncipe Ludovico, ya que Francisco I primogénito de Carlos III de Francia volvió Saboya, proporcionando a Francisco un segundo pretexto para la guerra: reclamar el este ducado pese a haber desistido en la paz nombre de su madre Luisa, en contra de Cambrailos derechos del legítimo duque.