Con motivo de la campaña de Austria, Carlos I decide organizar un cuerpo permanente de infantería, aunque sigue compuesto por un número variable de banderas. A su regreso a Italia, este contingente se divide en los tres tercios primigenios (Nápoles y Sicilia, Lombardía, Niza). Antes de acabar el año se desdoblará el primero y se creará un quintoen Florencia. En 1538 los tres originales son disueltos, y sus denominaciones pasan a otros creados con anterioridad o otras unidades de reciente creación. Esta dinámica se repetirá en años sucesivos1548 cuando los tercios de Sicilia y Nápoles pasen a Alemania.